Obiettivi formativi
Biologia Molecolare: Spiegare attraverso esempi e casi pratici le ricadute applicative, in ambito biotecnologico, di concetti e nozioni della Biologia Molecolare di base.
Prerequisiti
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Contenuti dell'insegnamento
<p> Stabilità, denaturazione-rinaturazione, melting-annealing degli acidi nucleici: Southern blot, Northern blot e "indirect labelling". <br />
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Struttura/composizione chimica degli acidi nucleici: strategie di marcatura diretta; sintesi di oligonucleotidi e varie forme di degradazione controllata del DNA e dell'RNA. <br />
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Enzimi di restrizione: struttura/funzione e principali applicazioni <br />
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Replicazione del DNA e sue applicazioni in ambito biotecnologico: preparazione di sonde a DNA; varie tipologie di PCR; diagnostica molecolare basata su PCR (patologie umane, virus); sequenziamento enzimatico del DNA (metodo di Sanger); "deep sequencing" mediante pirosequenziamento. <br />
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Trascrizione del DNA: mappatura dei trascritti mediante "primer extension"; set up sperimentale e lettura dei risultati prodotti dall'analisi delle interazioni proteina-DNA mediante "footprinting" e "electrophoretic mobility shift assay" (EMSA). <br />
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Retrotrascrizione: RT-PCR e le sue applicazioni; costruzione di genoteche a cDNA. <br />
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La ricombinazione sito-specifica e le sue applicazioni: ricombinasi Cre e FLP e la creazione di mutanti knock-out condizionali, l'eliminazione mirata di marcatori di selezione e l'attivazione sito-specifica di transgeni; clonaggio molecolare mediante il sistema Gateway.</p>
Programma esteso
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Bibliografia
<p>Watson J.D., Backer T.A., Bell S. P., Gann A.,Levine M., Losick R. <br />
BIOLOGIA MOLECOLARE DEL GENE (V Edizione) <br />
Zanichelli Editore, 2005 <br />
H. Lodish et al. <br />
MOLECULAR CELL BIOLOGY <br />
Freeman, 2008 <br />
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Materiale didattico "dedicato" messo a disposizione degli studenti <br />
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Metodi didattici
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Modalità verifica apprendimento
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Altre informazioni
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