Obiettivi formativi
Il corso si propone di fornire le informazioni ed i supporti scientifici per un corretto approccio metodologico agli aspetti applicativi della Biochimica Clinica, specifico per lo studente del Corso di Laurea in Tecniche di laboratorio biomedico.
Tali conoscenze sono necessarie per comprendere la complessità legata al trattamento del campione biologico, per comprendere le possibili fonti di errore e mettere in pratica gli adeguati rimedi; inoltre, la conoscenza generale dei principi metodologici ed i passaggi attraverso cui viene attuata una metodica analitica fornisce la base culturale per lo studio delle Tecniche diagnostiche di Biochimica Clinica
Prerequisiti
Non sono previste propedeuticità, ma considerando che gli argomenti di Biochimica Clinica sonomateria interdisciplinare, è opportuno che lo studente abbia ben presenti i concetti fondamentali di Biologia,Chimica Generale, Chimica Organica e Biochimica.
Contenuti dell'insegnamento
- Le analisi nel laboratorio di Biochimica Clinica. Il campione biologico: preparazione del soggetto, raccolta, trattamento e conservazione (variabilità pre-analitica). Criteri di non accettabilità dei campioni biologici.
- Tipi di campione biologico. Modalità di prelievo. Vantaggi e svantaggi in accordo con la attendibilità del dato di laboratorio.
- Analisi su sangue intero, plasma o siero. Coagulazione e anticoagulanti.
Metodiche di separazione in fase disomogenea. Centrifugazione: Teoria della sedimentazione; Metodo di calcolo della forza centrifuga e del tempo di centrifugazione; Tecniche di centrifugazione: differenziale, a gradiente, zonale, isopicnica. Tipi di centrifughe. Rotori.
-Sangue: composizione e omeostasi. Analisi Biochimico-Cliniche più comuni: Valutazione quantitativa delle proteine ematiche.
Spettroscopia UV-Visibile: Radiazioni elettromagnetiche; Interazioni radiazioni elettromagnetiche con la materia; Cromofori e transizioni; Intensità del fenomeno di assorbimento atomico e molecolare; Spettrofotometri; Analisi quantitativa e qualitativa.
Metodi di separazione delle proteine plasmatiche: Gel-Elettroforesi, Elettroforesi capillare.
Dosaggi Immunometrici: Antigeni ed anticorpi; Marcatura di antigeni ed anticorpi; Principio del dosaggio immunometrico. Misura della radioattività, della fluorescenza, della chemiluminescenza. Dosaggi nefelometrici e turbidimetrici.
-Captazione, trasporto cessione ed utilizzo dell’ossigeno. Cenni di Bioenergetica. Emoglobine normali e patologiche, separazione e dosaggio.
Separazione in fase omogenea. Tecniche cromatografiche: Concetto di ritenzione in cromatografia. Efficienza, selettività e risoluzione. Metodi di separazione: cromatografia di adsorbimento, di ripartizione, a fasi legate. Cromatografia a fase inversa, a scambio ionico, a coppia ionica, ad esclusione molecolare, di affinità. Cromatografia liquida ad alta risoluzione (HPLC): pompe, iniettori, colonne, rivelatori.
-Enzimi e vitamine. La catalisi biologica. Cinetica enzimatica. Regolazione dell’attività enzimatica. Metodi di dosaggio di un enzima.
Isoenzimi. Metodi di separazione e di dosaggio degli isoenzimi
-Variabilità analitica e post-analitica. Criteri di attendibilità del dato. Precisione e accuratezza. Tipi di errore e loro cause. Ripetibilità e riproducibilità. Deviazione standard e coefficiente di variazione (CV).Precisione e accuratezza; Specificità e sensibilità analitiche e diagnostiche. Valori predittivi. Prevalenza ed incidenza.Valutazione di una metodica analitica. Curva operativa caratteristica (ROC).
La sicurezza del dato di laboratorio. Taratura dello strumento; calibratori. Il controllo di qualità interno ed esterno; carte di controllo (Levey-Jennings).
-Omeostasi del glucosio ematico. Digestione ed assorbimento dei glucidi. Metabolismo anaerobio del glucosio nel globulo rosso. Metabolismo dei carboidrati nel fegato e nel muscolo. Ciclo di Krebs e ricollegamento alla bioenergetica. Regolazione ormonale del controllo glicemico
Analisi Biochimico-Cliniche più comuni: Misura della glicemia. Campione biologico; cause di errore. Metodi di dosaggio della glicemia. Spettrofotometria e spettrofotometri; analisi qualitativa e quantitativa del glucosio. Legge di Lambert-Beer.
-Lipidemia e dosaggio dei lipidi ematici. Cenni su digestione, assorbimento e distribuzione dei lipidi nell’organismo animale. Ossidazione degli acidi grassi; chetogenesi. Biosintesi e deposito degli acidi grassi. Colesterolo e steroidi. Lipoproteine e aterogenesi.
Lipidemia: composizione ed omeostasi. Interferenze sul campione biologico. Metodi di dosaggio diretti e indiretti. Ultracentrifugazione.
-Azoto ematico: urea e ammonio. Cenni sul metabolismo degli aminoacidi: Digestione e assorbimento delle proteine; Utilizzo degli aminoacidi; metabolismo dello scheletro carbonioso e destino del gruppo aminico.
- Profilo elettrolitico. Cenni sul bilancio dell’acqua e degli elettroliti. Controllo dell’equilibrio acido-base. Principi di elettrochimica. Emogasanalisi.
-Proteine della matrice extracellulare. Cenni sul rimodellamento del tessuto osseo e sull’origine dei marcatori della fibrosi tissutale.
-Nozioni fondamentali riguardo alla biosintesi e catabolismo dell’eme
-Cenni sul catabolismo delle basi puriniche
-Specie reattive dell’ossigeno e dell’azoto. Ciclo dell’esoso monofosfato.
-Valori di riferimento; concetto di normalità in biologia. Valori desiderabili, valori decisionali.
-Analisi chimico-cliniche al di fuori del laboratorio centralizzato (POCT: Point Of Care Testing). Criteri per il decentramento delle analisi chimico cliniche. Controllo di qualità nel POCT.Tipi di campioni biologici utilizzabili e loro trattamento al di fuori del laboratorio centrale.Analisi chimico cliniche “al letto del malato”, “sul campo” o “sul luogo di lavoro”. Automonitoraggio di alcuni parametri metabolici.Preparati per test diagnostici.
Bibliografia
J.W.Baynes, M.H.Dominiczak. Biochimica per le discipline biomediche. Casa Editrice Ambrosiana
L. Spandrio.Biochimica Clinica.Ed. Sorbona ¿ Milano.
Metodi didattici
L¿esame finale (orale) verterà sugli argomenti del programma; lo studente dovrà dimostrare di aver compreso e di essere in grado di utilizzare i concetti fondamentali di ogni argomento.
